DIFERENTES TRATAMENTOS DE AMOSTRAS DE DNA PARA QUANTIFICAÇÃO DE BABESIA BOVIS ATRAVÉS DE QPCR
Autor(es): TALITA B. BILHASSI, RODRIGO GIGLIOTI, ADRIANA M. G. IBELLI, THALITA ATHIÊ NÉO, MARCIO DIAS RABELO, THUANE CAROLINE GONÇALVES, CLARISSA HELENA SANTANA, ANA CAROLINA DE SOUZA CHAGAS, HENRIQUE NUNES DE OLIVEIRA, ROSANGELA ZACARIAS MACHADO, MARCIA CRISTINA DE SENA OLIVEIRA
DIFERENTES TRATAMENTOS DE AMOSTRAS DE DNA PARA QUANTIFICAÇÃO DE BABESIA BOVIS ATRAVÉS DE QPCR
» Área de pesquisa: PROTOZOOLOGIA
» Instituição: UNESP JABOTICABAL
» Agência de fomento e patrocinadores: FAPESP n. 2013/16246-9
A quantificação do DNA de Babesia bovis por meio da técnica de PCR quantitativo em tempo real (qPCR), em amostras de DNA de bovinos portadores sadios, pode ser dificultada pela pequena quantidade do DNA alvo ou pela presença de interferentes. Assim, o objetivo deste experimento foi verificar qual o melhor tratamento da amostra de DNA extraído de sangue, para obtenção de menores valores médios do ciclo quantitativo (Cq) na amplificação do DNA de B. bovis. Para isto, dez amostras de sangue foram colhidas de bovinos portadores sadios de B. bovis e o DNA foi extraído usando o Kit Easy-DNATM (Invitrogen). As amostras extraídas tiveram as concentrações de DNA, medidas através de espectrofotômetro (NanoDrop) e foram divididas em três alíquotas, sendo que uma permaneceu sem tratamento, a segunda foi purificada em coluna de sílica e a terceira foi diluída a 5 ng/uL de DNA. As amostras foram submetidas à detecção do DNA de B. bovis através da técnica da qPCR, utilizando o reagente SsoFastTM EvaGreen® Supermix (BioRad), seguindo a técnica descrita por Buling et al., (2007). Os resultados dos valores de Cqs obtidos para cada tipo de amostra foram submetidos a análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey. Foram encontradas diferenças significativas(P<0,05) entre as médias de Cqs, que foram de 34,10; 36,19 e 36,16, para as amostras de DNA sem diluir, purificadas e diluídas a 5ng/uL, respectivamente. O presente trabalho demonstrou que o uso do DNA extraído pelo kit comercial sem qualquer tratamento, apresentou melhores resultados para a quantificação do DNA de B. bovis.
