ANAIS 2014

ELISA INDIRETO CONTRA ANTICORPOS DE CYSTOISOSPORA FELIS EM BUBALINOS DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO Autor(es): WALTER FLAUSINO, GISELE SANTOS DE MEIRELES, MATHEUS DIAS CORDEIRO

ELISA INDIRETO CONTRA ANTICORPOS DE CYSTOISOSPORA FELIS EM BUBALINOS DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO

» Á�rea de pesquisa: PROTOZOOLOGIA

» Instituição: UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO

» Agência de fomento e patrocinadores: CNPq,FAPERJ,CAPES

ELISA INDIRETO CONTRA ANTICORPOS DE Cystoisospora felis EM BUBALINOS DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO. Walter Flausino, Gisele Santos de Meireles, Matheus Dias Cordeiro Phd IV/DPA/UFRRJ Mv. Msc. Dsc Doutorando do CPGCV/UFRRJ Cystoisospora felis é um coccídio intestinal que no Brasil pode ser encontrado frequentemente nas fezes de felinos domésticos e silvestres. Pouco se sabe sobre a ação deste parasito sobre o rebanho bubalino. Com isso, este trabalho tem por objetivo identificar bubalinos naturalmente infectados com C. felis através do teste de “ELISA INDIRETO” em propriedades de diferentes microrregiões do estado do Rio de janeiro, expostas ou não a presença de felinos. Para isso, um isolado puro de oocistos esporulados de C. felis, foi inoculado via oral, em gatos livres de coccídios e monitorados desde o nascimento. Um bezerro búfalo com 2 dias de nascido, foi desafiado através da inoculação oral com 106 oocistos esporulados, a fim de obter o controle positivo. Para produção do antígeno, os oocistos foram ressuspensos em 1,5 ml de PBS estéril, em tubos de microteste, submetido a 12 ciclos de agitação, com duração de 30” com intervalos de 30” para desfragmentação. Depois submetidos à centrifugação a 12000g durante 5 min. Para execução do teste ELISA utilizou-se microplacas sensibilizadas com o antígeno em overnight a 4°C, posteriormente foram bloqueadas com solução de leite desnatado a 6% em estufa a 37°C. Uma vez lavadas com PBS foram adicionadas aos poços das placas os soros testes e os controles diluídos em PBS(diluição) em seguida essas placas foram incubadas à 37°C por 90 minutos. Após novamente lavadas foi adicionado, o conjugado (IgG de coelho anti IgG bovina ligado a fosfatase alcalina), aguardou-se o período de incubação de 90 minutos à 37°C para realização da última lavagem. Por fim, foi adicionado o substrato revelador do teste (para-nitro-fenil-fosfato de sódio - pNPP) e submetidas a leitura em espectrofotômetro com comprimento de onda de 405 nm. Dos 313 bubalinos testados foram encontrados 275 soropositivos, evidenciando ELISA como eletivo para diagnóstico de búfalos naturalmente infectados por C. felis.