DETECÇÃO DE BABESIA BOVIS A PARTIR DE DIFERENTES FRAÇÕES DO SANGUE DE BOVINOS PELA QPCR
Autor(es): Rodrigo Giglioti, Adriana Mércia Guarantini Ibelli, Clarissa Helena Santana, Márcio Dias Rabelo, Ana Carolina de Souza Chagas , Rosângela Zacarias Machado, Henrique Nunes de Oliveira, Márcia Cristina de Sena Oliveira |
| O uso de técnicas baseadas em PCR tem possibilitado a rápida estimativa da prevalência e do nível de infecção por hemoparasitas em populações de bovinos. A baixa quantidade de DNA alvo e a presença de contaminantes nas amostras extraídas de sangue, pode dificultar o diagnóstico das babesioses em bovinos portadores sadios. Assim o objetivo do presente estudo foi verificar se o uso de diferentes frações do sangue pode influenciar a detecção do DNA de B. bovis, em reações de PCR em tempo real (qPCR). Assim, foram colhidas amostras de sangue de cinco animais portadores sadios, de B. bovis, sendo uma contendo EDTA e outra sem anticoagulante. O DNA foi extraído a partir do sangue com EDTA, do plasma resultante da centrifugação, do coágulo e do soro sanguíneo. Todas as extrações foram realizadas a partir de 300 µl de amostra e 300 mg de coágulo, usando o Kit ilustra blood genomicPrep Mini Spin (GE Healthcare®). As amostras de DNA obtidas foram usadas no mesmo protocolo de qPCR, usando primers específicos que flanqueiam parte do gene do citocromo B de B. bovis e o reagente SsoFastTM EvaGreen® Supermix da BioRad. Os valores do ciclo quantitativo (Cq) de cada amostra foram analisados em duplicatas e suas médias foram comparadas estatisticamente através de um delineamento inteiramente casualizado, usando o teste de Tukey, do pacote estatístico do SAS (2002/2003). Foram verificadas diferenças significativas entre as frações do sangue (P<0,05) estudadas. As médias seguidas de desvio-padrão de Cq para o coágulo, sangue total, soro e plasma foram 41,44±0,74; 37,17±0,48, 37,36±0,51 e 37,01±0,22, respectivamente. Os resultados obtidos sugerem que amostras de plasma podem ser mais eficientes para diagnosticar e quantificar B. bovis em bovinos. |
