| As infestações por Rhipicephalus microplus são um dos maiores problemas que afetam a produtividade do gado no Brasil. A ivermectina é um dos produtos mais utilizados para o controle, mas sua utilização indiscriminada conduziu a seleção de linhagens resistentes de carrapatos. Acredita-se que a resistência à ivermectina é mediada por mutações nos genes codificantes dos canais de cloro, mas é provável a existência de mecanismos metabólicos de resistência envolvendo alterações na expressão gênica de diversas famílias enzimáticas. Para testar esta hipótese, foram realizadas análises comparativas de expressão gênica em duas cepas de referência de R. microplus: Mozo (suscetível) e Juarez (resistente) utilizando a técnica de RNA-Seq. Foram realizados testes de imersão larval nas duas cepas de referência com ivermectina nas concentrações de 0, 10 e 100 ppm. O RNA extraído foi sequenciado na plataforma Illumina HiSeq. Foram obtidos o seguinte número aproximado de sequências (em milhões), para cada cepa e concentrações de ivermectina. Juarez (0): 38, Juarez (10 ppm): 31, Juarez (100 ppm): 30, Mozo (0): 36, Mozo (10 ppm): 34, Mozo (100 ppm): 37. As sequências correspondentes à mesma linhagem e concentrações de ivermectina foram concatenadas num único arquivo e as regiões de má qualidade das sequências foram retiradas. As sequências de melhor qualidade serão utilizadas na montagem de novo gerando uma sequência consenso contígua (contigs). Eles serão anotados através da comparação com sequências disponíveis em bases de dados púbicas via BLAST. As sequências de cada amostra serão alinhadas contra o banco de dados de contigs e a partir deste alinhamento serão identificados genes cuja expressão esteja possivelmente envolvida na resistência. Os níveis de expressão serão determinados para cada cepa e concentração de ivermectina. A identificação dos genes e quantificação de seus níveis de expressão permitirão revelar possíveis mecanismos de resistência ainda desconhecidos. |
