AVALIAÇÃO DE DIFERENTES ALVOS MOLECULARES PARA CARACTERIZAÇÃO DE ESPÉCIES DE LEISHMANIA POR MEIO DA RFLP
Autor(es): Cíntia Nascimento da Costa Oliveira, Rayana Carla Silva de Morais, Lays Adrianne Mendonça Trajano Silva , Rômulo Pessoa e Silva , Suênia da Cunha Gonçalves de Albuquerque , Fábio Lopes de Melo , Maria Edileuza Felinto de Brito , Sinval Pinto Brandão-Filho , Milena de Paiva Cavalcanti
AVALIAçãO DE DIFERENTES ALVOS MOLECULARES PARA CARACTERIZAçãO DE ESPéCIES DE LEISHMANIA POR MEIO DA RFLP
» Área de pesquisa: DOENÇAS VETORIAIS
» Instituição: Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães
» Agência de fomento e patrocinadores: Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco- FACEPE
Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico- CNPq
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior- CAPES
A leishmaniose tegumentar Americana (LTA) apresenta complexo ciclo epidemiológico, envolvendo diferentes espécies de animais silvestres, sinantrópicos e domésticos. O papel dos animais domésticos neste ciclo, ainda não foi bem esclarecido. A avaliação de técnicas que auxiliem na caracterização das espécies envolvidas com a etiologia da LTA fornece subsídios para o aprimoramento de estudos epidemiológicos e de interação parasito-hospedeiro. Neste contexto, a análise de diferentes alvos moleculares traz alternativas para a escolha da melhor ferramenta a ser utilizada para este fim. Este trabalho teve como objetivo avaliar três alvos moleculares pertencentes ao rDNA e kDNA para fins de caracterização de Leishmania spp. através da Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP). Para tanto, foram realizados ensaios de PCR com os sistemas kDNA1 (5’ATGCCTCTGGGTAGGGGCGTTC3’, 5’GGGAGCGCGGCCCACTATATT3’), SSUrDNA (5’CGACAAGCGCTCTCCC3’, 5’CCCAGTACGTTCTCCC3’) e ITS1 (LITSR 5’CTGGATCATTTTCCGATG3’, L5.8S 5’TGATACCACTTATCGCACTT3’), seguindo as condições estabelecidas pelos autores, em oito cepas de referência de Leishmania spp. Em seguida, os produtos foram digeridos pela enzima Hae III. A análise dos padrões formados foi realizada por meio de eletroforese em gel de agarose a 3% e 4%. Após a determinação do melhor alvo, o sistema escolhido foi utilizado para a caracterização das espécies envolvidas com a etiologia da LTA em 100 amostras de sangue de cães procedentes de áreas endêmicas do estado de Pernambuco. A visualização do padrão de digestão dos produtos para o rDNA (ITS1 e SSUrDNA) não apresentou resultados satisfatórios. O alvo SSUrDNA não diferenciou as espécies em análise; os resultados para o ITS1 apresentaram ausência de reprodutibilidade. Porém, o padrão estabelecido para o kDNA conseguiu identificar as cepas de referências, caracterizando 100% das amostras utilizadas como Leishmania (Viannia) braziliensis. Assim, pode-se concluir que o kDNA é um bom alvo para caracterização de espécies, havendo a necessidade de novos estudos para a avaliação do papel dos animais domésticos no ciclo da LTA.
