ESTABELECIMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE NOVA LINHAGEM DE CÉLULAS DE CARRAPATO DE RHIPICEPHALUS MICROPLUS
Autor(es): JESSICA FERNANDES DE SOUZA, Bruna de Azevedo Baêta, Rafaella Câmara Teixeira, Carla Carolina Dias Uzedo Ribeiro, Bruna Sampaio Martins Land Manier, Adivaldo Henrique da Fonseca
ESTABELECIMENTO E CARACTERIZAçãO DE NOVA LINHAGEM DE CéLULAS DE CARRAPATO DE RHIPICEPHALUS MICROPLUS
» Área de pesquisa: ACAROLOGIA
» Instituição: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
» Agência de fomento e patrocinadores: CAPES; CNPq; FAPERJ
O carrapato Rhipicephalus microplus é o mais importante ectoparasita dos rebanhos bovinos e está presente em todas as áreas tropicais. O objetivo deste trabalho, foi estabelecer linhagem a partir da formação da monocamada de células embrionárias de R. microplus e caracteriza-la molecularmente através da reação em cadeia de polimerase (PCR). Foram utilizadas dez teleóginas ingurgitadas, coletadas através de uma infestação experimental em bezerros da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Os carrapatos foram lavados e esterilizados devidamente e colocados em placas de Petri estéreis. No 13° dia de postura, o pool de ovos foi esterilizado através de lavagens sucessivas com álcool 70 e água ultrapura estéril. Posteriormente, os ovos foram macerados, filtrados e centrifugados a 200 xg por 10 minutos. O pellet resultante foi ressuspenso com meio de cultivo Leibovitz L-15 suplementado com soro fetal bovino, caldo triptose fosfato, L-glutamina e penicilina/estreptomicina. Foram realizadas trocas semanais de meio e após a formação da monocamada foi realizado o primeiro subcultivo com sete meses. Para a caracterização, foi realizada a extração do DNA com kit Qiagen segundo protocolo do fabricante. Foi realizado PCR para o gene 16S e o produto foi separado por electroforese em gel de agarose a 1,5 % com coloração de brometo de etídio. O fragmento amplificado foi purificado utilizando o kit de GE Healthcare e quantificado com Low DNA Mass Ladder . O sequenciamento de ambas as fitas foi realizado utilizando o Kit v3.1 Cycle Sequencing BigDye ® Terminator e analisados em ABI 3730 DNA Analyser (tecnologia da Applied Biosystems ).Foram observadas células com aparência de fibroblastos e arredondadas, no entanto, quando atingiram a confluência as células se tornaram arredondadas. O sequenciamento identificou 100% de similaridade com R. microplus. A nova linhagem em estabelecimento permitirá novos estudos com patógenos uma vez ser a primeira linhagem brasileira de células de carrapato.
