ANAIS 2014

AVALIAÇÃO DA APLICABILIDADE DA TÉCNICA DE PCR EM TEMPO REAL PARA CARACTERIZAÇÃO DE LEISHMANIA SPP. Autor(es): Rayana Carla Silva de Morais, Cintia Nascimento da Costa Oliveira , Suênia da Cunha Gonçalves de Albuquerque, Lays Adrianne Mendonça Trajano Silva , Rômulo Pessoa e Silva , Heidi Lacerda Alves da Cruz , Maria Edileuza Felinto de Brito , Fábio Lopes de Melo , Sinval Pinto Brandão-Filho , Milena de Paiva Cavalcanti

AVALIAçãO DA APLICABILIDADE DA TéCNICA DE PCR EM TEMPO REAL PARA CARACTERIZAçãO DE LEISHMANIA SPP.

» Á�rea de pesquisa: DOENÇAS VETORIAIS

» Instituição: Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães

» Agência de fomento e patrocinadores: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco (FACEPE)

A leishmaniose tegumentar Americana (LTA) é uma zoonose causada por protozoários do gênero Leishmania, envolvidas em um complexo ciclo biológico. No Brasil, sete espécies estão relacionadas com a etiologia da LTA, distribuídas em distintas regiões geográficas, envolvendo diferentes hospedeiros reservatórios, responsáveis por diferentes apresentações clínicas da doença. Diante disso, o diagnóstico em conjunto com a identificação da espécie é de grande importância clínica-terapêutica. Objetiva-se neste trabalho avaliar a aplicabilidade da técnica de PCR quantitativa em tempo real (qPCR) para identificação de espécies de Leishmania envolvidas com a etiologia da LTA. Foram realizados ensaios de qPCR para padronização da Temperatura de melting (Tm) utilizando cepas de referência de Leishmania spp. Amostras de sangue de cães positivas através dos sistemas kDNA1 e SSu rDNA, foram analisadas através de suas Tm, e os produtos de qPCR foram purificados e sequenciados. Dez amostras previamente caracterizadas por isoenzimas (padrão-ouro), também tiveram suas Tm analisadas. Após padronização da Tm das espécies, foram criados dois intervalos: 1, (Tm de 78-79,99°C) compreendendo: Leishmania (Viannia) braziliensis, Leishmania (V.) panamensis, Leishmania (V.) lainsoni, Leishmania (V.) guyanensis e Leishmania (V.) shawi; e 2, (Tm de 80-82,2°C) compreendendo: Leishmania (V.) naiffi, Leishmania (Leishmania) amazonensis e Leishmania (L.) mexicana. Um total de 280 amostras foram testadas, sendo 223 positivas, destas, 58 foram incluídas no intervalo 1 e 165 no intervalo 2. O sequenciamento de 94 destas amostras foi correspondente à L. (V.) braziliensis, L. (V.) panamensis e L. (V.) guyanensis. A análise da Tm das amostras caracterizadas por isoenzimas, demonstrou 80% de concordância entre o padrão-ouro e o intervalo criado neste estudo. Até o momento, é possível concluir que a qPCR pode ser utilizada como ferramenta auxiliar para direcionamento da espécie de Leishmania, em amostras de sangue de cães, não dispensando a caracterização por métodos clássicos quando a precisão na identificação for necessária.