PADRONIZAÇÃO DE UMA NPCR-RFLP PARA A IDENTIFICAÇÃO DAS ESPÉCIES QUE CAUSAM EIMERIOSE BOVINA (RESULTADOS PRELIMINARES)
Autor(es): Luiz Daniel de Barros, Sérgio Tosi Cardim, Victor Bittencourt Dutra Tabacow, Thais Agostinho Martins, Mércia de Seixas, Elliot Keats Shwab, Chunlei Su, João Luis Garcia
PADRONIZAçãO DE UMA NPCR-RFLP PARA A IDENTIFICAçãO DAS ESPéCIES QUE CAUSAM EIMERIOSE BOVINA (RESULTADOS PRELIMINARES)
» Área de pesquisa: PROTOZOOLOGIA
» Instituição: Universidade Estadual de Londrina
» Agência de fomento e patrocinadores: CAPES
A eimeriose bovina é uma enfermidade de distribuição mundial causada pelo protozoário do gênero Eimeria. Descrita como uma das principais causas de perdas perdas econômicas na bovinocultura, é causada por mais de 20 diferentes espécies de Eimeria. O objetivo do presente trabalho foi padronizar uma técnica de uma nested PCR-RFLP para a identificação das principais espécies de Eimeria que acometem os bovinos. Amostras de fezes de 50 bovinos de diferentes idades foram coletadas de propriedades leiteras da região norte do estado do Paraná. Em seguida, foi realizado o diagnóstico parasitológico para a identificação das espécies de Eimeria por morfomicrometria. Amostras positivas foram armazenadas em solução de dicromato 5% e posteriormente submetidas a extração de DNA dos oocistos utilizando um kit comercial . Sequencias do gene 18S rDNA das espécies E. bovis, E. ellipsoidalis, E. auburnensis, E. bukidnonensis, E. cylindrica, E. Subspherica, E. wyomingensis e E. zuernii depositadas no GenBank foram utilizadas para alinhamento e desenho dos primers externos e internos. Os produtos da PCR foram submetidos à uma tripla digestão enzimática (MwoI, KnpI e HpyCH4III) e ao sequenciamento para confirmação das espécies. A nested PCR amplificou um segmento de aproximadamente 345pb correspondente ao gene 18S rDNA. Através da digestão enzimática, foi possível identificar três padrões eletroforéticos que identificaram 7 espécies. No entanto, estudos adicionais estão sendo realizados para diferenciação de todas as espécies de acordo com o padrão do comprimento de fragmentos de restrição, o que tornaria a técnica uma importante ferramenta em estudos epidemiológicos da eimeriose bovina.
