| Toxoplasma gondii é um protozoário coccídeo que possui uma estrutura populacional altamente clonal, consistindo de três linhagens, designadas Tipo I, II e III. Contudo os genótipos do Brasil são mais diversificados, possuindo grande quantidade de alelos atípicos. Chaetomys subspinosus é um roedor arborícola, endêmico da Mata Atlântica, o qual já foi abundante, mas devido à redução do seu ambiente natural e à caça, passou a figurar na categoria de animais vulneráveis à extinção. O objetivo deste trabalho foi caracterizar geneticamente cepas de T. gondii isoladas de C. subspinosus, através das técnicas de multilocus PCR-RFLP e PCR-sequenciamento. Foram amostrados 12 indivíduos de C. subspinosus. Destes foram coletados materiais biológicos (sangue e tecido). O DNA foi extraído utilizando-se o kit Easy-DNA® (Invitrogen). Para a detectação dos isolados a amplificação do DNA de T. gondii foi realizada utilizando os primer Tox4 e Tox5. Aplicação de multilocos PCR-RFLP e a PCR-sequenciamento para a caracterização foi realizada com seis marcadores moleculares (SAG1, SAG2, SAG3, C22-8, PK1 e Apico). Foram detectados três isolados de T. gondii (TgCsBr01-03). Aplicação de multilocos PCR-RFLP identificaram dois genótipos diferentes. Os isolados TgCsBr02 e TgCsBr03 foram indistinguíveis por esta técnica. No entanto, quando os seis marcadores genéticos foram empregados em multilocus PCR-sequenciamento, todos os três isolados de T. gondii foram diferentes. As sequências amplificadas com os marcadores C22-8 e Apico foram as mais polimórficas e os marcadores SAG1, SAG2, SAG3 e PK1 foram mais conservados. A análise filogenética revelou que o isolado TgCsBr01 possui uma maior distância genética e os isolados TgCsBr02-03 foram classificados na mesma linhagem. Todos os isolados diferiram dos genótipos clonais Tipo I, II e III utilizando ambas as técnicas de genotipagem. Os resultados revelaram um novo genótipo brasileiro de T. gondii. PCR-sequenciamento melhor infere a diversidade genética e estrutura populacional de cepas de T. gondii do Brasil. |
