INCLUSÃO DE CONTROLES DE QUALIDADE AMOSTRAL PARA O APRIMORAMENTO DO DIAGNÓSTICO MOLECULAR DA LEISHMANIOSE CUTÂNEA.
Autor(es): LAYS ADRIANNE MENDONÇA TRAJANO SILVA, RÔMULO PESSOA E SILVA, SUÊNIA DA CUNHA GONÇALVES DE ALBUQUERQUE, RAYANA CARLA SILVA DE MORAIS, CÍNTIA NASCIMENTO DA COSTA OLIVEIRA, ANDREIA DA SILVA, TÂNIA MARIA CABRAL DE FRANÇA, VÂNIA BARBOSA TAVARES DA CUNHA, SINVAL PINTO BRANDÃO FILHO, MILENA DE PAIVA CAVALCANTI |
| A leishmaniose cutânea (LC) é uma doença causada por protozoários do gênero Leishmania. Cães podem ser infectados por Leishmania (V.) braziliensis, desenvolvendo sintomas semelhantes aos humanos. Entretanto, a função de reservatórios dos cães ainda é discutida. Consequentemente, tornam-se necessários estudos de métodos capazes de fornecer um diagnóstico acurado. A utilização da PCR quantitativa em tempo real (qPCR) como alternativa no diagnóstico vem acumulando vantagens frente à PCR convencional. Para diminuir as chances de resultados errôneos, se faz necessária à inclusão de um controle de qualidade amostral na reação, como o gene constitutivo G3PD. Os controles já são utilizados na prática laboratorial, mas, em reações separadas, gerando mais custo e prolongando o tempo para emissão dos resultados. Sendo assim, objetiva-se padronizar uma multiplex qPCR para detectar simultaneamente os alvos de L. (V.) braziliensis e o gene G3PD de mamíferos. Para tanto, utilizando o software Primer Quest, foram desenhadas duas sondas TaqMan adaptáveis aos sistemas SSUrDNA e G3PD1, para detecção simultânea dos alvos L. (V.) braziliensis e G3PD (controle interno), respectivamente. Testes preliminares definiram as concentrações de sonda e primers dos dois alvos separadamente. O novo teste encontra-se em fase de análise do limite de detecção. A análise do índice de Kappa, comparando os resultados obtidos com os testes de referência também será realizada. Foram escolhidas as concentrações de 3 e 2 pmol/µL de primers para os sistemas G3PD1 e SSUrDNA respectivamente, e 0,5 pmol/µL de sonda para ambos os sistemas. A análise in silico das sondas G3PD1 e SSUrDNA demonstrou impossibilidade de anelamento com alvos inespecíficos. Espera-se, após a avaliação do novo protocolo, fornecer um diagnóstico mais acurado, rápido e com quantificação da carga parasitária em os cães e pacientes humanos infectados, reduzindo os resultados falso-negativos e os custos na rotina, possibilitando também a aplicação em pesquisas clínicas e epidemiológicas. |
