PRODUÇÃO DE ANTICORPO POLICLONAL DE TRYPANOSOMA EVANSI E AVALIAÇÃO POR WESTERN BLOTTING
Autor(es): Franciane Batista , Paulo Henrique Exterchoter Weiss, Bruna Larissa Boaventura , Luiz Claudio Miletti
PRODUçãO DE ANTICORPO POLICLONAL DE TRYPANOSOMA EVANSI E AVALIAçãO POR WESTERN BLOTTING
» Área de pesquisa: PROTOZOOLOGIA
» Instituição: UNIVERSIDADE DO ESTADO DE SANTA CATARINA
» Agência de fomento e patrocinadores: CAPES, CNPQ, FAPESC
O Trypanosoma evansi é o agente etiológico da doença conhecida como mal das cadeiras ou surra. Trata-se de uma doença de extrema importância em alguns países, pois a mesma causa grandes prejuízos econômicos na pecuária. Este trabalho tem como objetivo a produção de anticorpos específicos contra T.evansi, que possam ser utilizados em técnicas de diagnósticos. Para realização deste projeto foram utilizados três Ratos Wistar com oito semanas de idades. Todos os cobaias receberam a primeira imunização por via intraperitoneal. No Rato 1 foi inoculado 270µg de proteínas e 100µL de adjuvante de Freund completo. No Rato 2 foi inoculado 100µL de T.evansi fixado em formaldeído. O rato 3 foi utilizado como controle negativo. Após 14 dias do início do procedimento uma nova imunização foi realizada seguindo o mesmo protocolo somente substituindo adjuvante de Freund completo pelo incompleto. No dia 28 do experimento, o procedimento anterior foi repetido. No dia 38 foi realizado o primeiro sangramento para obtenção da amostra teste em todas as cobaias. O sangramento foi realizado do seio orbital com um tubo de hematócrito. No dia 42 foi realizado um novo reforço com as mesmas quantidades do dia 28. No dia 52 foi realizado o sangramento total dos cobaias, para este procedimento os animais foram anestesiados e foi realizado punção cardíaca. O sangue obtido foi centrifugado e o soro congelado. Para testar o soro foi realizado Western blot nas diferentes diluições 1:500, 1:1000, 1:2000, 1:4000, 1:6000 e 1:8000. Todas as diluições testadas apresentaram-se positivas e o soro do animal negativo não apresentou reação. Os anticorpos produzidos mostraram-se eficazes na identificação de proteínas específicas de T. evansi e podem ser utilizadas nas diferentes provas de diagnóstico.
Palavras chave: trypanosoma evansi, anticorpo, westwen blot
