EXTRAÇÃO DE DNA DE LEISHMANIA SP. DE TECIDO PARAFINADO DE CÃES COM LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA.
Autor(es): GABRIELA TJHIO CÉSAR PESTANA BARROS, ARIANE PEREIRA BENITES, GUSTAVO GONÇALVES, LEANDRO HIGA, CACILDA TEZELLI JUNQUEIRA PADOVANI, INES APARECIDA TOZETTI, CARLOS EURICO DOS SANTOS, ALDA MARIA TEIXEIRA FERREIRA
EXTRAÇÃO DE DNA DE LEISHMANIA SP. DE TECIDO PARAFINADO DE CÃES COM LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA.
» Área de pesquisa: PROTOZOOLOGIA
» Instituição: Universidade Federal de Mato Grosso do Sul
» Agência de fomento e patrocinadores: FUNDECT e UFMS
A Leishmaniose Visceral (LV) é considerada uma das principais doenças negligenciadas no Brasil, tendo como agente etiológico um protozoário intracelular obrigatório (Leishmania sp.), cujo ciclo transita entre insetos dípteros e mamíferos. Uma vez que as alterações clínicas e histopatológicas são muito inespecíficas na doença, preconiza-se a associação de distintos testes laboratoriais para seu diagnóstico. Devido a alta sensibilidade e especificidade do exame parasitológico, este é amplamente utilizado assim como as técnicas moleculares, constantemente implantadas em centros de pesquisa e diagnóstico. Neste trabalho, foram associadas a quantificação parasitológica a partir de visualização microscópica de lâminas de imprint de baço canino e diagnóstico molecular a partir de fragmentos do mesmo tecido, obtidos de blocos parafinados. As amostras foram coletadas de animais positivos sorologicamente (1:40) sintomáticos (n=10) e assintomáticos (n=10) do Centro de Controle de Zoonoses de Campo Grande, MS e de animais negativos sorologicamente (n=10) em uma clínica veterinária particular no mesmo município. A quantificação parasitológica foi realizada por meio da contagem de amastigotas em 50 campos (M.O. 1000x), e obtenção de uma média de amastigotas por campo. Então, as amostras foram categorizadas em três estratos: 1) 0 a 5; 2) 5,1 a 10 e 3) acima de 10,1 parasitas/campo. As amostras parafinadas foram submetidas à desparafinização, extração e purificação de DNA e subsequente amplificação por PCR (Polimerase Chain Reaction). Os resultados foram analisados estatisticamente e verificou-se que o estrato contendo maiores faixas parasitárias correlaciona-se significativamente (p = 0,009) com os resultados positivos na PCR. Embora vários interferentes possam estar presentes nesse tipo de amostra, dificultando a obtenção de DNA purificado e de boa qualidade, os métodos utilizados permitiram a detecção de DNA de Leishmania sp. A análise parasitológica contribuiu de maneira relevante para análise dos resultados, uma vez que delineou o do quão raro poderia ser o alvo na secção analisada.
