IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE HAEMONCHUS CONTORTUS E HAEMOCHUS PLACEI COM PARES DE OLIGONUCLEOTÍDEOS INICIADORES ESPÉCIE-ESPECÍFICOS.
Autor(es): Mônica Regina Vendrame Amarante, Michelle Cardoso dos Santos, Maria Regina Lucas da Silva, César Cristiano Bassetto, Alessandro Francisco Talamini do Amarante
IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE HAEMONCHUS CONTORTUS E HAEMOCHUS PLACEI COM PARES DE OLIGONUCLEOTÍDEOS INICIADORES ESPÉCIE-ESPECÍFICOS.
» Área de pesquisa: HELMINTOLOGIA
» Instituição: Depto. de Parasitologia, Instituto de Biociências – Unesp/Campus de Botucatu, Botucatu, SP/Brasil
» Agência de fomento e patrocinadores: CNPq, FAPESP e Fundibio
Infecções por Haemonchus spp. estão entre as principais causas de perda econômica nas criações de ruminantes devido à redução no ganho de peso e mortalidade de bovinos e pequenos ruminantes. Na maioria dos estudos realizados no Brasil, a distinção entre as espécies Haemonchus contortus e Haemonchus placei não tem sido considerada. Vários relatos de H. contortus, particularmente em bovinos, podem se tratar, na realidade, de infecção por H. placei. O objetivo deste trabalho foi identificar H. contortus e H. placei através da Reação de Polimerização em Cadeia (PCR) com o emprego de dois pares de oligonucleotídeos iniciadores espécie-específicos, que foram desenhados a partir de sequências de DNA ribossomal. Inicialmente, os espécimes utilizados foram previamente identificados morfologicamente, com base na medida dos espículos. Nas amplificações realizadas com amostras de H. contortus e H. placei foram obtidas as bandas de 260 e 460 pares de base (pb), respectivamente. A especificidade destas amplificações foi comprovada com a utilização de outras 17 amostras de DNA de nematóides disponíveis em nosso laboratório, incluindo H. placei e H. similis. Para comprovar a qualidade e a presença de DNA nas demais amostras, realizou-se, ainda, uma PCR com outro par de oligonucleotídeos iniciadores que amplifica uma região conservada do DNA ribossomal, resultando em bandas de, aproximadamente, 400 a 500 pb em todas as amostras de DNA, inclusive nas dos hospedeiros (bovinos e ovinos), que albergam esses nematóides. Em conclusão, foi possível identificar com precisão as espécies H. contortus e H. placei com os dois novos pares de oligonucleotídeos iniciadores. Esta ferramenta molecular será útil nos estudos de epidemiologia das gastroenterites parasitárias de ruminantes.
