CRIOPROTETORES E TEMPERATURAS DE CONGELAMENTO NA CRIOPRESERVAÇAO DE LARVAS DE TRICHOSTRONGYLUS COLUBRIFORMIS E HAEMONCHUS CONTORTUS
Autor(es): Érika Breda Canova, LUCIANA MORITA KATIKI, TALI PEREIRA LIMA ASPIS, HEVERTON LUIS MOREIRA, Claudia Cristina Paro Paz, Keila Maria Roncato Duarte, Lécio Aparecido Castilho, Joaquim Everaldo Martins dos Santos, Helder Louvandini |
| A criopreservação de larvas infectantes convém para manutenção de cepas de nematóides por longos períodos, como finalidade de diminuir o uso de animais infectados em biotérios. Objetivou-se testar a temperatura de -80°C em ultrafreezer (UF) e -160°C em nitrogênio liquido (NL) e quatro tipos de crioprotetores: cloreto de sódio (NaCl); gema de ovo (gema); 10% glicerol; 10% dimetilsulfóxido (DMSO) e 5% DMSO mais 5% glicerol (DMSO+glic) na criopreservação das larvas (L3) de Trichostrongylus colubriformis e Haemonchus contortus. O trabalho foi conduzido no Instituto de Zootecnia (IZ/APTA/SAA) em Nova Odessa/SP. As larvas de T. Colubriformis e H. contortus foram produzidas por coproculturas de animais doadores com infecções monoespecíficas para cada espécie. As larvas foram desembainhadas com solução de hipoclorito de sódio e contadas. Mil larvas/500μL de água destilada foram acondicionadas em tubos criogênicos, acrescidos 1500 μL de crioprotetores e armazenadas em UF e NL, por um período de 30 dias. As análises foram realizadas pelo PROC/GLM do SAS, tendo como efeito os crioprotetores, temperaturas e crioprotetores versus temperatura, e suas variáveis dependentes. Os melhores resultados para criopreservação de L3 de T. colubriformis foram encontrados para NaCl como crioprotetor, tanto para NL (91,6%) como UF (91,3%), seguido por glicerol em UF (74%), DMSO+glic em UF (71,2%), DMSO em UF (63%), DMSO em NL (46%), gema em UF (45,8%), gema em NL (39,5%), DMSO+glic em NL (28,9%), glicerol em NL (28,1%), por fim, gema em UF (4,1%). Os melhores resultados para a criopreservação de H. contortus foram para NaCl como crioprotetor em UF (84,7%), seguido por NaCl em NL (71,8%), glicerol em UF (66,5%), DMSO+glic em UF (61,2%), DMSO em UF (48,4%), gema em UF (28,5%), glicerol em NL (10%), por fim, DMSO+glic em NL (2,7%). O melhor crioprotetor utilizado para a conservação das L3 foi para NaCl em UF por 30 dias. |
