ANTICORPO MONOCLONAL CONTRA VTDCE, UMA ENZIMA DA EMBRIOGENÊSE DO RHIPICEPHALUS MICROPLUS
Autor(es): Mariana Loner Coutinho, Daiane Patrícia Oldiges, Itabajara da Silva Vaz Jr
ANTICORPO MONOCLONAL CONTRA VTDCE, UMA ENZIMA DA EMBRIOGENêSE DO RHIPICEPHALUS MICROPLUS
» Área de pesquisa: ACAROLOGIA
» Instituição: UFRGS
» Agência de fomento e patrocinadores: CNPq, CAPES, FAPERGS, FAPERJ, INCT-Entomologia Molecular
A VTDCE é uma cisteíno endopeptidase degradadora de vitelina (VT) do carrapato Rhipicephalus microplus, sendo encontrada em ovos estando naturalmente associada à vitelina, seu substrato natural. Dentre as enzimas descritas no ovo que atuam sobre a vitelina, a que apresenta maior atividade in vitro sobre VT é a VTDCE, atividade esta que pode ser inibida por anticorpos. A sua atividade enzimática foi detectada em larvas não alimentadas, ovários e ovos de fêmeas ingurgitadas, sugerindo um papel na embriogênese do carrapato bovino. A VTDCE também possui atividade antimicrobiana in vitro contra a bactéria Staphylococcus epidermidis. Este trabalho relata a produção de anticorpo monoclonal contra a VTDCE visando a caracterização da importância fisiológica desta enzima atraves da utilizacao dos anticorpos para inibição da atividade enzimática. Camundongos Balb/c foram imunizados com VTDCE recombinante (rVTDCE) fusionada à tiorredoxina e os seus esplenócitos foram utilizados para produção de hibridomas. A triagem de células produtoras de anticorpos foi realizada através de ELISA indireto utilizando como antígeno a rVTDCE sem a proteína de fusão. Foram obtidas 6 linhagem secretoras de anticorpos mas apenas uma mostrou-se estável. O anticorpo produzido por esta linhagem (4B8) é do isotipo IgG1 e foi capaz de reconhecer a VTDCE nativa obtida a partir de extrato de ovo de R. microplus em western blot. Conclui-se que a imunização com VTDCE recombinante permite produzir anticorpos que reagem contra a proteína nativa.
